material e metodos (PDF)




File information


Author: Pedro Mauricio

This PDF 1.5 document has been generated by Microsoft® Word 2016, and has been sent on pdf-archive.com on 09/10/2016 at 19:59, from IP address 177.183.x.x. The current document download page has been viewed 257 times.
File size: 11.9 KB (2 pages).
Privacy: public file










File preview


C. Efeitos da concentração de enzima, temperatura e pH na atividade
enzimática.
1) Numerar 7 tubos, sendo um deles o branco. Adicionar os reagentes seguindo a
tabela 2.
2) Os tubos 1,2 referem-se ao efeito da concentração enzimática; os tubos 3,4
referem-se ao efeito da temperatura e os tubos 5,6 relacionam-se ao efeito do pH.
3) Em um tubo de ensaio separado, levar 1 mL de enzima 1/10 ao banho-maria a
95 ºC durante 5 minutos e colocá-lo de volta no gelo. Este preparado será utilizado no
tubo 3. Após isto, adicionar as soluções aos outros tubos conforme a tabela 2.
4) O tubo 4 deverá permanecer durante todo o tempo no gelo.

5) Depois de colocadas as enzimas nos tubos, agitar suavemente e remover os
tubos: Br, 1, 2, 3 e 5 do gelo e, coloca-los no banho-maria a 37 ºC por 5 minutos, ao
mesmo tempo. Após os 5 minutos, colocar rapidamente os tubos de volta no gelo.

6) Enquanto os tubos ainda estiverem no gelo, adicionar 2 mL de DNS em todos
os tubos.

7) Colocar os tubos no banho-maria a 95 ºC por 10 minutos. Transcorrido o
tempo, levar os tubos em tigela com água corrente e adicionar 16 mL de água destilada
em todos os tubos. Homogeneizar os tubos 4 vezes por inversão total.

8) Ler absorbâncias a 540 nm contra o branco.

9) Calcular a atividade enzimática em Unidades (U) em todos os tubos. Utilizando
a concentração de proteínas totais do extrato não diluído, calcular as atividades
específicas das amostras em U/mg.

D. Cálculo da atividade enzimática (utilizando curva-padrão e fator da última
aula).

O fator da curva padrão de BSA da aula anterior será utilizado neste experimento,
assumindo que o fator de Absorbância x Concentração de proteína total, medido na aula
anterior pelo método do biureto com extrato de levedura não foi alterado. Com este fator
será calculada a concentração de proteínas totais do extrato bruto de levedura ([Proteína]
= Abs. x F), e também será utilizado para calcular a atividade específica da enzima
invertase nos extratos.

1) Utilizando a tabela 4, adicionar 2,5 mL de reagente de biureto e 1,5 mL de água
ao tubo branco. No tubo 1, adicionar 2,5 mL de biureto, 1 mL de extrato de levedura e
0,5 mL de água. Agitar levemente os tubos. Levar ao banho-maria a 37ºC durante 15
minutos. Medir a absorbância a 550nm.






Download material e metodos



material e metodos.pdf (PDF, 11.9 KB)


Download PDF







Share this file on social networks



     





Link to this page



Permanent link

Use the permanent link to the download page to share your document on Facebook, Twitter, LinkedIn, or directly with a contact by e-Mail, Messenger, Whatsapp, Line..




Short link

Use the short link to share your document on Twitter or by text message (SMS)




HTML Code

Copy the following HTML code to share your document on a Website or Blog




QR Code to this page


QR Code link to PDF file material e metodos.pdf






This file has been shared publicly by a user of PDF Archive.
Document ID: 0000492719.
Report illicit content